ODCZYNNIKI DO BADAŃ MIKROBIOLOGICZNYCH

Nowoczesna analiza mikroorganizmów wykorzystuje poza parametrami strukturalnymi również parametry funkcjonalne związane z fizjologią komórek. Pozwala to określać stadia/formy fizjologiczne komórek drobnoustrojów, co znacząco poprawia rozdzielczość uzyskiwanych wyników ale przede wszystkim ich wartość z punktu widzenia diagnostyki mikrobiologicznej np. w przemyśle spożywczym. Możliwe staje się wówczas wykrywania form pośrednich tzw. VBNC (viable but non-culturable cells) mikroorganizmów, które z racji ograniczonej aktywności metabolicznej i/lub częściowych uszkodzeń błony i ściany komórkowej nie są wykrywane metodami klasycznej mikrobiologii (techniki hodowlane) oraz technikami opartymi na oznaczeniach tylko integralności błony i ściany komórkowej. Prowadzi to do fałszywie pozytywnych wyników oznaczeń skażenia mikrobiologicznego.

W portfolio Thermo Fisher Scientific znajdują się następujące zestawy do oznaczeń kombinacji parametrów strukturalnych i funkcjonalnych komórek mikroorganizmów:

• BacLight™ RedoxSensor™ Green Vitality Kit – nr kat. B34954

  Zestaw zawiera nieprzepuszczalny przez błonę barwnik DNA jodek propidyny (PI) do oceny żywotności komórek oraz odczynnik RedoxSensor Green do pomiaru aktywności metabolicznej. Związek ten jest wskaźnikiem komórkowego potencjału oksydoredukcyjnego, stanowiąc substrat dla komórkowych enzymów z grupy oksydo-reduktaz i jednocześnie prekursor fluorochromu. Wytworzony barwnik fluorescencyjny po wzbudzeniu emituje zieloną fluorescencję, której intensywność jest wprost proporcjonalna do komórkowego potencjału redoks. Umożliwia to wykrywanie aktywnych, uszkodzonych, uśpionych oraz nieaktywnych/martwych form komórek mikroorganizmów.

• LIVE/DEAD™ Cell Vitality Assay Kit, C₁₂ Resazurin/SYTOX™ Green – nr kat. L34951

  Ten dwukolorowy test fluorescencyjny rozróżnia komórki metabolicznie aktywne od uszkodzonych i martwych komórek. Test opiera się na redukcji C12-rezazuryny do czerwono-fluorescencyjnego C12-rezorufiny w komórkach metabolicznie aktywnych oraz na wychwycie nieprzepuszczalnego dla błony komórkowej, zielono-fluorescencyjnego barwnika kwasów nukleinowych SYTOX Green w komórkach z uszkodzoną błoną plazmatyczną (zwykle komórkach w późnej fazie apoptozy i martwiczych).

• FungaLight™ Yeast CFDA, AM/Propidium Iodide Vitality Kit – nr kat. F34953

  Zestaw zawiera wskaźnik integralności błony komórkowej (PI) oraz przepuszczalny dla komórek substrat dla komórkowych esteraz. Po dostaniu się do komórki, lipofilowe grupy blokujące i diacetatowe substratu są rozkładane przez niespecyficzne esterazy, co prowadzi do powstania fluorescencyjnej, naładowanej formy, która bardzo wolno wydostaje się z komórek.

• BacLight™ RedoxSensor™ CTC Vitality Kit – nr kat. B34956

  Zestaw opiera się na barwniku fluorescencyjnym do oceny integralności błony komórkowej (PI) oraz odczynnika CTC, który przez aktywne enzymy łańcucha transportu elektronów są redukowane do nierozpuszczalnego formazanu wykazującego czerwoną fluorescencję. Zielone i niebieskie fluorescencyjne barwniki kwasów nukleinowych są dołączone jako barwniki kontrastowe, aby ułatwić odróżnienie komórek od resztek i obliczenie całkowitej liczby komórek.

• LIVE/DEAD™ Yeast Viability Kit – nr kat. C10427

  Zestaw łączy nowatorską dwukolorową sondę fluorescencyjną do oceny żywotności drożdży, FUN® 1, z fluorescencyjnym odczynnikiem znakującym powierzchnię grzybów, Calcofluor® White M2R. Integralność błony plazmatycznej i aktywność metaboliczna komórek drożdży są niezbędne do przekształcenia wewnątrz komórki żółto-zielonej fluorescencji barwnika FUN® 1 w czerwono-pomarańczowe struktury wewnątrz-wakuolarne; Calcofluor White M2R wyznakowuje chitynę ściany komórkowej niebieską fluorescencją, niezależnie od stanu metabolicznego.

• CellEvent™ Caspase-3/7 Green Flow Cytometry Assay Kit – nr kat. C10427

  Zestaw zawiera przepuszczalny dla komórek odczynnik, który składa się z czteroaminokwasowego peptydu (DEVD) sprzężonego z barwnikiem fluorescencyjnym wiążącym kwasy nukleinowe. Podczas apoptozy aktywowane są komórkowe kaspazy, które rozszczepiają specyficzną sekwencję zawartą w peptydzie DEVD, co prowadzi do wiązania barwnika z DNA komórki. W zestawie znajduje się również barwnik fluorescencyjny SYTOX™ AADvanced™ Dead Cell Stain. W ten sposób możliwe jest rozróżnianie komórek apoptotycznych od żywych i nekrotycznych.

Thermo Fisher Scientific posiada również konwencjonalne zestawy i barwniki fluorescencyjne do oznaczeń żywotności komórek mikroorganizmów na podstawie parametrów strukturalnych:

• LIVE/DEAD™ BacLight™ Bacterial Viability Kits – nr kat. L7012

• SYTOX™ AADvanced™ Dead Cell Stain Kit – nr kat. S10349

• SYTOX AADvanced™ Ready Flow™ Reagent – nr kat. R37173

• SYTOX™ Green Nucleic Acid Stain – 5 mM Solution in DMSO – nr kat. S7020

• SYTOX™ Blue Dead Cell Stain, for flow cytometry – nr kat. S34857

• NucGreen™ Dead 488 ReadyProbes™ Reagent (SYTOX™ Green) – nr kat. R37109

• SYTOX™ Dead Cell Stain Sampler Kit, for flow cytometry – nr kat. S34862

prof. dr hab. Wojciech Juzwa
aplikacje@cyto-logic.pl
+48 889 735 598